卫生部肾脏病临床研究重点实验室 （Key Renal Laboratory of the Ministry of Health）

1．主要研究方向
①肾小球疾病；②肾小管-间质疾病；③肾脏替代治疗。
2.已取得科研业绩
方向一 肾小球疾病
肾小球疾病是我国终末期肾衰竭（ESRD）的主要病因。探讨其免疫发病机制并进行干预治疗，对延缓慢性肾脏疾病进展，减少ESRD发生率具有重要意义。在国家自然科学基金等各级科研基金的资助下，我们进行了相关系列研究，结果证实，在骨调素（OPN）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、RANTES等细胞因子作用下，通过p38MAPK、NF-kB及钙调神经苷酸酶（CaN）等信号通路调控，巨噬细胞（MΦ）在肾组织聚集、增生和活化，导致炎症持续和放大。同时证实，抑制炎症细胞浸润及增生是“改进的CTX静脉冲击疗法”的主要疗效机制。主要研究进展和突破包括：
⑴ 创立“改进的CTX静脉冲击疗法”治疗重症狼疮性肾炎，效果显著，与NIH方案相比，疾病缓解率提高30%（87.3% vs 57.3%）,而副作用发生率无差别。该方案已成为国内治疗狼疮性肾炎的常规方法。
⑵ 提出狼疮性肾炎尿毒症可逆性的观点及针对肾脏炎症的治疗方案，并对37例患者进行了15年的追踪观察,结果83.3%脱离透析。上述研究结果更正了既往认为尿毒症不可逆的观点，使部分具有可逆性的尿毒症患者得到了及时治疗，脱离了尿毒症状态。
⑶ 巨噬细胞局部浸润是许多肾脏疾病的主要病理特征，是判断疾病严重程度、预后和疗效的重要参考指标。我们的研究结果发现，巨噬细胞局部增生是导致肾脏损伤和巨噬细胞肾脏局部浸润的主要机制，更新了人们既往认为巨噬细胞仅在肾脏局部浸润并不增生的不正确认识，对于指导临床治疗具有重要意义。
⑷ 揭示了骨调素高表达是肾组织巨噬细胞局部浸润的关键因子；IL-1和AngII通过p38MAPK信号通路调控骨调素表达。抑制骨调素表达可减轻肾间质巨噬细胞浸润和损伤。巨噬细胞移动抑制因子在巨噬细胞的局部聚集及增生中发挥重要作用，并可反向调控皮质醇的分泌和作用。
⑸ 发明了一种通用的抗体靶向非病毒型基因导入系统，并获得了发明专利（专利号:ZL 03 1 26650.9）。
本研究方向共发表科研论文96篇，其中SCI收录12篇；获得专利1项；被国际期刊引用284次；获全国优秀博士学位论文奖1篇。临床研究方案已被全国高等学校统编校教材《内科学》采用。经原中华肾脏病学会主任委员谌贻璞教授为主任委员的专家组鉴定，该成果总体水平达国际先进，部分领域达到国际领先。
该成果被评为2006年度国家科技进步二等奖。
方向二 肾小管-间质疾病
在国家自然科学基金（30270630）、广东省自然科学基金团队项目、广东省名医工程项目等基金的支持下，我们重点研究了致纤维化的关键因子转化生长因子β（TGF-β）及其细胞内信号蛋白Smads在肾小管上皮细胞转分化中的重要作用，并探讨其抑制性信号蛋白Smad7在抑制肾小管上皮细胞转分化中的作用及分子机制，为将来探讨肾脏纤维化的防治措施奠定基础，研究结果及进展情况如下：
⑴ TGF-β通过其细胞内信号蛋白R-Smad在肾小管—间质细胞外基质积聚以及细胞表型改变发生中起重要作用。上调表达I-Smad（smad7）可显著抑制R-Smads（smad2, smad3）的活性，阻断肾小管上皮表型改变和细胞外基质的积聚。从细胞分子水平提示，上调表达TGF-β的I-Smad（smad7）信号蛋白有可能防止肾脏纤维化的发生发展，这对于探讨防治肾脏纤维化的措施具有重要意义。此外，我们还发现，AGEs可通过TGF-β1依赖和非依赖途径激活Smads信号蛋白，I-Smad7 阻抑AGEs介导的近端肾小管上皮细胞转分化和CollagenⅠ合成。
⑵ TGF-β1刺激肾小管上皮细胞转分化（EMT）过程中相关靶蛋白的表达变化是我们研究的另一重点。结果我们应用比较蛋白组学方法研究发现，TGF-β1诱导肾小管上皮细胞发生转分化（EMT）过程中可诱导包括与细胞骨架相关蛋白，与翻译后修饰相关蛋白，代谢酶类及细胞因子等多种蛋白表达变化，这些结果有助于深入理解EMT的具体分子机制，阐明肾脏疾病慢性进展的机制。
⑶ 尿蛋白在肾间质纤维化中的作用已引起许多学者重视。但是，蛋白尿是如何造成肾脏损伤的？能否在尿蛋白的组分中找到早期诊断的标记来判断肾脏疾病的预后及对激素的敏感性？我们的研究结果发现，不同病理类型肾病患者尿蛋白组成有显著差别，尿转铁蛋白、IgG及β2微球蛋白与肾小管间质的损害密切相关；不同病理类型肾病患者尿蛋白组成或结构存在差异，其对肾小管上皮细胞的作用也有所不同，这可能是具同样大量蛋白尿的不同病理类型肾病患者间质损害程度不同的原因之一。
本研究已取得了很好的进展，6篇摘要在美国肾脏病年会交流，3篇科研论文已分别投送到Kidney Int、 NDT等肾脏病学权威杂志，正在审稿之中。
方向三 肾脏替代治疗
⑴ 腹膜透析
腹膜透析是治疗终末期肾脏病的主要方法之一。经过近30年的努力，已经建成了中国腹膜透析治疗、随访和研究中心，“腹膜透析的系列研究及推广应用”曾获得1993年国家科技进步三等奖。近年来，在国家自然科学基金、卫生部临床学科重点项目、全国百篇优秀博士学位论文基金等项目的支持下，对腹膜透析相关的腹膜结构、转运功能及防御机制等前沿领域进行了深入研究，主要研究成果有：
①腹膜表面超微结构：发现正常大鼠腹膜表面覆盖着一层膜样结构，主要成分有表面蛋白A、磷脂、透明质酸等，该层在腹膜溶质转运中有重要的屏障作用。高糖透析液及腹腔振动均可显著增加腹膜通透性，后者与腹膜表面层的破坏有关，本研究对进一步探讨腹膜保护措施提供了依据，具有重要的临床意义。
②透明质酸（HA）：发现透明质酸合成酶（HAS）-2是人腹膜间皮细胞合成HA的关键酶。HA生物学功能与其分子量大小密切相关。高浓度葡萄糖及低分子量HA显著上调与炎症反应相关的HAS-3的表达，而高分子量HA可以防止长期使用含葡萄糖透析液所引起的腹膜超滤下降，对于临床选用合适的透析液进行治疗提供依据。
③腹腔内液体容量及腹腔残余液体量对腹膜转运功能的影响：发现增加腹腔透析液容量除增加淋巴重吸收率外，并不加重腹膜功能的损害。而高腹腔残余液体量则降低净超滤；降低溶质弥散系数和腹膜小分子溶质清除率，从而损害葡萄糖透析液的透析效能，对于临床选用合适的容量治疗病人具有重要的指导意义。
④CD40的研究：发现人和大鼠腹膜间皮细胞功能性表达CD40；CAPD腹膜炎时，透出液中巨噬细胞CD40L表达水平显著增加。随着炎症的消退，CD40L恢复正常。提示CD40与CD40L相互作用参与了腹腔局部防御，巨噬细胞CD40L表达水平可作为CAPD相关性腹膜炎诊断和预后判断的参数。
⑤PPARγ的研究：发现腹膜间皮细胞功能性表达PPARγ；PPARγ配体15d-PGJ2、Ciglitazone活化PPARγ能显著下调腹膜间皮细胞CD40及ICAM-1表达。提示腹膜间皮细胞功能性表达PPARγ，通过负性调节炎症介质表达而参与腹腔局部防御。活化PPARγ有助于腹膜慢性炎症的控制，从而具有保护腹膜功能的作用。
⑥TGF-β/Smads信号通路的研究：发现TGF-β可显著上调大鼠腹膜间皮细胞Smad2/3基因和蛋白水平的表达。应用基因转移技术将Smad7转入腹膜间皮细胞，高度表达Smad7可显著下调Smad2/3的表达，并减少促炎症因子IL-1、TNF-α及巨噬细胞化学性趋化因子骨调素的表达，并抑制腹膜间皮细胞向纤维母细胞的转化，提示上调表达抑制性信号蛋白smad7可能具有抗炎和腹膜保护功能。
本成果对于阐明腹膜转运及防御机制具有重要价值，对临床透析方案的制定、腹膜炎的诊断和防治具有重要指导意义。
该系列研究已发表科研论文50篇，其中SCI收录8篇；被SCI收录杂志引用57次。相关研究论文获国际腹膜透析学会（ISPD）最高奖Maher奖、ISPD最佳论文摘要奖、ISPD青年学者奖及全国优秀博士学位论文奖。部分科研成果“腹膜转运与防御机制研究”获2002年教育部提名国家科技进步二等奖。。
⑵血液透析和肾脏移植
① 透析的充分性与营养研究 我们对广州地区的血液透析患者生存质量状况进行评估，并探讨影响血液透析生存质量的因素; 以及比较血液透析患者与腹膜透析患者生存质量状况。结果提示：透析充分性、iPTH、KT/V是影响血液透析和腹膜透析患者生存质量重要的因素之一，但KT/V在血透的作用高于KT/V在腹透的作用。营养状况尤其以 MQSGA、白蛋白和血红蛋白是血液透析患者生存质量最重要的影响因素之一。微炎症状态、残存尿量影响血透和腹透患者生存质量，其中IL-6是预示生存质量状态的最佳微炎症指标，是影响腹透患者生存质量的独立因素，上述研究对于进一步提高透析患者的长期存活率和生存质量具有重要意义。
② 肾移植术后巨细胞病毒（CMV）感染系列研究 CMV感染是器官移植术后头3个月最主要的感染合并症及死亡原因之一。我们建立了肾移植术后预防CMV感染和CMV病的技术规范 ①我们在国内率先采用免疫细胞化学法测定外周血白细胞CMV-PP65抗原，建立了诊断CMV感染的早期快速、敏感特异的方法；②建立了肾移植术后定期监测CMV-PP65抗原的技术规范：肾移植术后头3个月每周测定一次CMV-PP65抗原；③提出了肾移植术后预防性抗抗病毒药物使用的疗程，结果表明，CMV-PP65抗原血症指导的预防性抗病毒治疗可大大降低CMV病发病率及死亡率，对于提高肾移植患者的人/肾存活率具有重要意义。
3．实验室规模：
近5年来，共投入1200多万元建设了高水平的肾脏病实验室，现面积达600m2。主要仪器设备包括：激光共聚焦显微镜249.9万元，流式细胞仪150.6万元，转基因操作系统68.9万元，蛋白中压液相系统48.9万元，显微切割显微镜77.1万元，蛋白质制备系统48.9万元，全自动生化分析仪45.6万元，显微镜及图象分析系统31.5万元，全自动凝胶成像系统31.5万元，药物浓度分析仪40.0万元，毛细管电泳仪59.7万元，超速冷冻离心机 10万转 76.3万元，激光显微切割77.1万元，荧光定量PCR仪62.8万元。